苯酚硫酸法是一种常见的荧光法用于蛋白质定量。进行实验时需要注意以下事项。

样品制备

确保样品纯度：苯酚硫酸法对蛋白质纯度要求较高，影响测定结果，确保用于测定的样品纯度。

样品浓度：样品和标准品的浓度比应控制在1:10以下，不然可能会产生阳性偏低误差。

制备工作液

稀释体积和浓度：按照标准品浓度配制工作液，严格按照稀释体积，否则会产生误差。

考虑pH值：通常苯酚硫酸法的反应需要在强酸环境下进行，过酸或者过弱都会影响检测结果。

过滤液：工作液中混有较多的杂质可能会使光谱信号变差。应该在制备工作液时使用过滤器净化液。

测定过程

滴定过程：仪器需要具有精确的液体处理和分配功能，确保滴定液能够稳定加入反应试管中，并且有准确的读数功能。

防止光照射：苯酚硫酸法在紫外光照射下会发生非酶促荧光强度上升现象，影响检测结果，实验过程中避免光照射。

参比标准

选用适合的标准样品：不同种蛋白质对应的标准样品有所区别，如血清白蛋白的标准样品为BSA。必须选择包含标准样品的套装进行实验。

综上所述，苯酚硫酸法测定蛋白质需要多方面考虑，在实验过程前后都应格外小心，才能得到准确性高的实验结果。